Metode Farmakologi 6
Materi pertemuan keenam Metode Farmakologi, "Metode Pengujian Anti Dengue Secara Invitro"
Virus dengue (DENV), anggota keluarga Flaviviridae, merupakan ancaman kesehatan global karena menginfeksi lebih dari 100 juta orang setiap tahunnya. Terapi antivirus atau vaksin yang disetujui untuk pengobatan atau pencegahan infeksi DENV tidak tersedia. Dalam penelitian ini, senyawa alami disaring untuk aktivitas antiviralnya terhadap DENV dengan uji berbasis garis sel in vitro.
α-Mangostin, sebuah xanthanoid, diamati mengerahkan aktivitas antivirus terhadap DENV-2 dalam kondisi pengujian pra, bersama, dan pasca perawatan. Aktivitas antivirus ditentukan dengan uji unit pembentuk fokus (FFU), RT-PCR kuantitatif, dan uji imunofluoresensi berbasis sel (IFA). Penghambatan lengkap DENV-2 diamati pada 8μM di bawah kondisi co-perawatan. Kemungkinan mekanisme penghambatan α- Mangostin juga ditentukan oleh studi docking.
Eksperimen docking molekuler menunjukkan bahwa α- Mangostin dapat berinteraksi dengan beberapa target protein DENV seperti NS5 methyltransferase, NS2B-NS3 protease dan glikoprotein E. Temuan in vitro dan in silico menunjukkan bahwa α-Mangostin memiliki kemampuan untuk menekan DENV- 2 pada berbagai tahap siklus replikasinya dan mungkin bertindak sebagai agen profilaksis/terapi terhadap DENV-2.
Berikut link Youtube dari penjelasan materi :
dimana senyawa senyawa tanaman yang akan diuji aktivitas antivirus dilakukan dalam 3 kondisi yaitu pra-perawatan,pengobatan bersama dan pasca perawatan sel, bagaimana hasil yang didapatkan dalam senyawa tersebut terhadap 3 kondisi yang berbeda itu, apakah ada perbedaan hasil ataupun keefektifan dari senyawa terhadap reseptor antivirus tersebut jika dilakukan uji pada 3 kondisi yang berbeda?
BalasHapusPada tahapan pra- perawatan sel, selama infeksi (pengobatan bersama) dan setelah infeksi (pasca-perawatan) digunakan untuk melihat efek antivirus dari senyawa (pada dosis non-toksik maksimum) yang dinilai sebelum infeksi. Selama pra-perawatan, sel-sel (50.000 sel/sumur) diberi perlakuan awal dengan senyawa pada suhu 37◦C selama 24 jam. Kemudian senyawa yang mengandung supernatan kultur dihilangkan dan sel-selnya diinfeksi dengan 0,1 MOI DENV-2.
HapusSetelah infeksi, sel dicuci dua kali untuk menghilangkan virus yang tidak terikat dan disimpan untuk inkubasi dengan menambahkan media pemeliharaan (MEM dengan antibiotik dan 2% serum janin sapi). Dalam ko-pengobatan, virus dicampur dengan konsentrasi senyawa yang berbeda dan campuran tersebut digunakan untuk menginfeksi sel selama satu jam.
Untuk pasca perawatan, sel terinfeksi dengan 0,1 MOI DENV-2 selama 1 jam. dan diperlakukan dengan senyawa setelah 24 jam. Untuk semua jenis perawatan, sel diinkubasi selama lima hari pasca infeksi. Pada kontrol virus, sumur hanya berisi sel yang terinfeksi tanpa pengobatan apapun sedangkan kontrol sel berisi sel yang tidak terinfeksi saja. Dalam semua kondisi, piring dibekukan−80◦C dan dicairkan untuk mengumpulkan supernatan sel untuk estimasi kuantitatif RNA virus.
Supernatan yang dikumpulkan dari ketiga proses tsb digunakan untuk penentuan tingkat RNA genomik virus dengan RT-PCR waktu-nyata dan titer partikel virus menular dengan uji unit pembentuk fokus. Semua percobaan dilakukan dalam rangkap tiga menggunakan dua percobaan independen.
alpha mangostin merupakan senyawa golongan xanthon dimana pada pohon manggis itu terdapat dimana saja seperti kulit buah,putik buah dan getah batang manggis, bagaimanakah perbedaan kadar dari alpha mangostin dari setiap lokasi dimana pasti ada salah satu lokasi tersebut yang memiliki kadar alpha mangostin tertinggi terhadap aktivitas antivirusnya
BalasHapusSenyawa α-mangostin merupakan senyawa utama yang terdapat pada kulit buah manggis. Buah manggis pada kondisi matang memiliki kandungan α-mangostin lebih tinggi dibandingkan ketika buah manggis masih muda, yaitu sekitar dua kali lebih banyak.
HapusAlpha-mangostin (AMG) adalah xanthone utama yang terdapat didalam kulit buah, kulit kayu dan getah kering dari pohon manggis
namun dari literatur yang saya dapatkan hanya pengujian pada bagian kulitnya saja yang sudah diketahui kadar a mangostin yang terkandung. Beberapa senyawa aktif yang terdapat dalam kulit manggis berupa Xanthone, anthosianin. Selain xanthone kandungan senyawa aktifnya ialah anthosianin yang kisaran kadarnya 59%. Senyawa seperti alpha mangostin, gamma mangostin, garcinone C, garcinone D memiliki aktivitas antioksidan pemerangkapan DPPH yang tinggi, anti- malaria, dan bersinergi dengan artemisinin sebagai anti-malaria in vitro
didapat hasil bahwa tidak hanya alpha mangostin salah satu dari kelompok senyawa xanthon yang memiliki kemampuan dalam mengambat virus dengue. dari hasil yang penelitian bahwa ternyata dari ke7 kelompok senyawa xanthon termasuk alpha mangostin, senyawa mangostanol dan mangostinon lah yang dapat menjadi inhibitor potensial dengan afinitas terbaik terhadap virus dengue, bagaimanakah dari 3 senyawa tersebut dalam efektivitas terhadap virus dengue yang memiliki afinitas terbaik baik berdasarkan mekanisme kerja ataupun reseptor target dan toksisitas dari senyawa tersebut
BalasHapusDari hasil yang didapatkan, ketujuh senyawa xanthone memiliki kemampuan untuk menghambat konformasi protein envelope pada virus dengue karena mampu berinteraksi dengan binding site pada bagian pengikat β-OGpocket yang terdapat pada protein envelope virus dengue dan hasil molecular docking menunjukkan bahwa semua ligan xanthone memiliki afinitas dan potensial daya hambat yang lebih baik dibandingkan ligan pembanding dengan hasil terbaik senyawa mangostanol dan mangostinone dengan energi ikat -8,3 kkal/mol untuk mangostanol dan -8,6 kkal/mol untuk mangostinone. Terdapat konformasi konformasi ligan mangostanol dan mangostinone dengan binding site pada β-OG pocket binder yang terkandung dalam protein envelope virus dengue sehingga dapat berperan sebagai inhibitor potensial dengan afinitas terbaik. 3 kkal/mol untuk mangostanol dan -8,6 kkal/mol untuk mangostinone. Terdapat konformasi konformasi ligan mangostanol dan mangostinone dengan binding site pada β-OG pocket binder yang terkandung dalam protein envelope virus dengue sehingga dapat berperan sebagai inhibitor potensial dengan afinitas terbaik. 3 kkal/mol untuk mangostanol dan -8,6 kkal/ mol untuk mangostinone. Terdapat konformasi konformasi ligan mangostanol dan mangostinone dengan binding site pada β-OG pocket binder yang terkandung dalam protein envelope virus dengue sehingga dapat berperan sebagai inhibitor potensial dengan afinitas terbaik.
Hapus